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藥典中核酸殘留限量規(guī)定
WHO和各國(guó)藥物注冊(cè)監(jiān)管機(jī)構(gòu)一般只允許生物制劑中存在100 pg/劑量以下的殘留DNA，特殊情況下不大于10ng/劑量。根據(jù)雜質(zhì)來(lái)源和純化工藝的不同，一般酵母、大腸桿菌表達(dá)的生物制品中DNA殘留量不超過10ng/劑量，Vero和MDCK細(xì)胞表達(dá)的疫苗等生物制品中DNA殘留量不超過100pg/劑量或10pg/劑量（根據(jù)宿主細(xì)胞和給藥方式的不同，限量要求不同）。
DENARASE® 全能核酸酶
DENARASE®全能核酸酶是一款通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)的基因工程非限制性核酸內(nèi)切酶，其基因序列來(lái)自粘質(zhì)沙雷菌（Serratia marcescens），生產(chǎn)菌株是一種安全級(jí)別為S1級(jí)且不含內(nèi)毒素的革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌（Bacillus.sp.） ，大大降低了內(nèi)毒素污染風(fēng)險(xiǎn)。DENARASE®是c-LEcta GmbH公司在歐盟、美國(guó)、中國(guó)、印度、日本和韓國(guó)的注冊(cè)商標(biāo)（https://denarase.com/）。其擁有的自主專利生產(chǎn)工藝，完全采用非動(dòng)物性原料，不添加抗生素，符合歐盟GMP生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，通過ISO9001:2015質(zhì)量體系認(rèn)證，核酸酶純度大于99%，酶活性高，且無(wú)蛋白酶活性，是生物制品生產(chǎn)工藝中常用全能核酸酶的典型代表。
DENARASE®全能核酸酶能夠降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線性、超螺旋和環(huán)狀DNA、RNA及基因組DNA，對(duì)核酸序列沒有特異性。在純化工藝中使用DENARASE®全能核酸酶，可有效降低細(xì)胞裂解液粘度，改善蛋白純化工藝，高效去除重組蛋白制品核酸污染，大幅降低終產(chǎn)品污染風(fēng)險(xiǎn)，滿足法規(guī)要求，在細(xì)胞治療、病毒載體疫苗等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。DENARASE®全能核酸酶的DMF已經(jīng)提交，目前正處于審核階段。
核酸酶活性的影響因素分析
DENARASE®全能核酸酶在廣泛的條件下仍有很強(qiáng)的生物酶活性，跟大多數(shù)生物酶一樣，核酸酶的活性也會(huì)隨溫度、pH值、Mg2+、緩沖體系和底物濃度等因素的改變而變化。為了更好的發(fā)揮核酸酶的活性，幫助使用者更快的摸索出適宜的反應(yīng)條件，小編為各位提供一組對(duì)核酸酶活性影響較大的關(guān)鍵參數(shù)指標(biāo)供參考。（數(shù)據(jù)來(lái)源于廠家驗(yàn)證指導(dǎo)文件）
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溫度 |
適宜反應(yīng)溫度為37℃ |
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pH值 |
適宜pH值范圍是8.0-9.0之間 |
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Mg2+ |
適宜Mg2+濃度范圍是1-2mM |
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單價(jià)陽(yáng)離子濃度 |
推薦Na+和K+的濃度在100mM以下 |
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消泡乳化劑 |
4%的消泡乳化劑對(duì)核酸酶活性無(wú)明顯抑制作用 |
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緩沖系統(tǒng) |
高濃度的緩沖體系會(huì)抑制核酸酶的活性 Tris鹽酸緩沖體系活性大于Tris磷酸鹽緩沖體系 |
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底物濃度 |
DNA底物濃度不大于1mg/mL時(shí)活性較高 |
1 溫度
核酸酶適宜反應(yīng)溫度為37℃。
2 pH值
不同緩沖體系結(jié)果顯示，適宜pH值范圍在8.0-9.0之間。
3 Mg2+
輔助因子Mg2+適宜濃度范圍是1-2mM，當(dāng)增大Mg2+濃度時(shí)，酶活性會(huì)下降。
4 單價(jià)陽(yáng)離子濃度
單價(jià)陽(yáng)離子的存在會(huì)抑制核酸酶的活性，應(yīng)控制Na+和K+的濃度在100mM以下。
![C:\Users\64890\Documents\Tencent Files\64890897\FileRecv\MobileFile\Image\Y9[R[NDQ(NW(I}O]L)%6J2B.png](/Site/Default/Uploads/kindeditor/image/20210706/637611777624134231.006.png)
5 消泡乳化劑
消泡乳化劑常被應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的發(fā)酵液中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，4%的消泡乳化劑對(duì)核酸酶活性無(wú)明顯抑制作用。
![C:\Users\64890\Documents\Tencent Files\64890897\FileRecv\MobileFile\Image\P7WCY%}$9F]2X`8`83@SH9T.png](/Site/Default/Uploads/kindeditor/image/20210706/637611777624134231.007.png)
6 緩沖系統(tǒng)
高濃度的緩沖體系會(huì)抑制核酸酶的活性，在Tris鹽酸緩沖體系中酶活性大于Tris磷酸鹽緩沖體系。隨著Tris磷酸鹽緩沖體系中磷酸鹽濃度的增加，酶活性降低，然而Mg2+離子濃度的增加會(huì)削弱其抑制作用。
![C:\Users\64890\Documents\Tencent Files\64890897\FileRecv\MobileFile\Image\S]C7~9N)`N4TPPP1ZH)_}E4.png](/Site/Default/Uploads/kindeditor/image/20210706/637611777624134231.008.png)
DNA1 (standard):Sigma,D1626(salmon testes)
DNA2:Promega,D181A(herring sperm)
DNA3:GE Healthcare,27456501(200-6000 bps)
DNA4:Millipore,262015
7 底物種類及濃度
核酸酶對(duì)不同來(lái)源的DNA底物,降解的DNA片段長(zhǎng)度不同，下圖為不同來(lái)源DNA底物，濃度在1mg/mL的結(jié)果。為了保持核酸酶的高活性，DNA底物濃度應(yīng)不大于1mg/mL。
![C:\Users\64890\Documents\Tencent Files\64890897\FileRecv\MobileFile\Image\7AYKA7W5]4[[5@Z8XX[341D.png](/Site/Default/Uploads/kindeditor/image/20210706/637611777624134231.010.png)
![C:\Users\64890\Documents\Tencent Files\64890897\FileRecv\MobileFile\Image\2P]J0I2{KDWPJGSC$~)3TZN.png](/Site/Default/Uploads/kindeditor/image/20210706/637611777624134231.011.png)
DENARASE®全能核酸酶產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
規(guī)格 |
酶活 |
詳情 |
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20804-1M |
1 MU (1,000,000 Units) |
＞250 U/μl |
生產(chǎn)和灌裝全部符合EU GMP標(biāo)準(zhǔn)；適用于生物制品生產(chǎn)或有GMP要求的應(yīng)用中添加。 |
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20804-5M |
5 MU (5,000,000 Units) |
＞250 U/μl |
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20804-100k |
100 kU (100,000 Units) |
＞250 U/μl |
生產(chǎn)符合EU GMP標(biāo)準(zhǔn)，灌裝按照ISO 9001標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行；適用于生物制品研發(fā)或沒有GMP要求的應(yīng)用中添加。 |
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20804-500k |
500 kU (500,000 Units) |
＞250 U/μl |
DENARASE® 全能核酸酶重要參數(shù)
c-LEcta GmbH公司為了確保DENARASE®全能核酸酶的穩(wěn)定和高質(zhì)量水平，每個(gè)批次試劑均滿足以下參數(shù)的內(nèi)部驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。
酶活: >250 U/μL
純度: ≥99%
比活度：＞6*105 U/mg
蛋白酶活性：無(wú)
內(nèi)毒素：＜0.25EU/kU
總菌落數(shù)：＜250cfu/200μL
免費(fèi)試用進(jìn)行中
關(guān)注西美杰微信公眾號(hào)（微信號(hào)：xmjsci），回復(fù)“核酸酶試用”，填寫表單即可申請(qǐng)c-LEcta DENARASE® 核酸酶免費(fèi)試用機(jī)會(huì)，數(shù)量有限，先到先得！
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